過氯化氫酶定性實驗過程及操作方法--氯化氫
1.取4支干凈的試管,按a b c對照編號。放在試管架上備用。氯化氫
2.在A B C試管內分別加入 5ml、10ml、15ml的活性污泥混合液,再在A和B試管中分別加10 ml和5 ml蒸餾水。在對照管內加15 ml蒸餾水。
3.在A B C 及對照管中分別加入O.2%的淀粉液若干滴(淀粉液的用量,在做預備實驗時根據樣品中淀粉酶含量多少而定),迅速搖勻并記下反應的初始時間。
4.在上述4個管內分別加若干滴碘液(碘液用量在預備實驗時酌定),迅速搖勻,這時各管均呈藍色。
5.觀察結果。注意各管的變化,記下各管藍色完全消失時的時間(即淀粉酶和淀粉反應完全的時間),并對結果進行分析。
(二)細菌淀粉酶在固體培養基中的擴散實驗
1.將肉膏胨淀粉瓊脂培養基加熱融化,待冷至45℃左右倒人無菌培養皿內(每皿約10 ml),共倒3個,靜置待冷凝即成平板。
2.在無菌操作條件下,用接種環分別挑取枯草桿菌、大腸桿菌和活性污泥各一環分別在3個平板上點種5個點。倒置于37℃恒溫箱內培養24~48 h。
3.觀察結果,取出平板,分別在3個平板內菌落周圍滴加碘液,觀察菌落周圍顏色的變化。若在菌落周圍有一個無色的透明圈,說明該細菌產生淀粉酶并擴散到基質中去。若菌落周圍仍為藍色,說明該細菌不產生淀粉酶。
(三)氯化氫酶的定性測定
1.將配備的枯草桿菌和大腸桿菌斜面各1支放在試管架上。
2.用滴管吸取過氧化氫滴加入兩管菌種斜面上,有氣泡產生的為接觸酶陽性(有過氧化氫酶);無氣泡產生的為接觸酶陰性(無過氯化氫酶)。 |